对ELISA试剂盒测定结果有影响的原因有哪些?

2023-8-2 16:46| 发布者: 大海的鱼| 查看: 64| 评论: 0

摘要: 　ELISA试剂盒方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定，具有灵敏度高，操作简单等优点，但是在具体实验过程中影响因素较多，并且要按照严格的说明要求，在临床检验中除正常反应外，有时常可见到一些错误结果（即假阳性 ...

　ELISA试剂盒方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定，具有灵敏度高，操作简单等优点，但是在具体实验过程中影响因素较多，并且要按照严格的说明要求，在临床检验中除正常反应外，有时常可见到一些错误结果（即假阳性或假阴性结果）。且所有产品仅用于科研实验，不用于任何临床诊断。
　　影响ELISA测定错误结果的原因主要有：①标本因素；②试剂因素；③操作因素。抗体药物生产公司小编就标本因素对ELISA测定的影响做如下总结。
　　一、类风湿因子
　　人血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）可以与ELISA系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，从而导致假阳性。
　　解决办法
　　1.用F（ab）2替代完整的IgG；
　　2.标本用联有热变性（63℃，10 min）IgG的固相吸附剂处理（将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效）；
　　3.检测抗原时，可以用2-巯基乙醇等加入到标本稀释液中，使RF降解。
　　二、补体
　　ELISA系统中固相一抗和标记二抗过程中，抗体分子发生变构，其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q 可以将二者连接起来，从而造成假阳性。
　　解决办法
　　1.用EDTA稀释标本；
　　2.用53℃，10 min或56℃，30 min加热血清使C1q灭活。
　　三、嗜异性抗体
　　人类血清中含有能与啮齿类动物（如鼠等）Ig（s）结合的天然嗜异性抗体，可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来，也能造成假阳性。
　　解决办法
　　可在标本稀释液中加入过量的动物Ig（s），但加入量不足或亚类不同时无效。
　　四、嗜靶抗原的自身抗体
　　抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体，有时能与靶抗原结合形成复合物，在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定结果。
　　解决办法
　　测定前需用理化方法将其解离后再测定。