ELISA实验要点：生物医药cdmo洗涤是关键

2023-7-12 20:23| 发布者: 大海的鱼| 查看: 89| 评论: 0

摘要: 　　优化ELISA的重点之一在于洗涤。生物医药cdmo洗涤步骤可降低未结合抗体所引起的背景信号，从而增加分析的信噪比。每一步之间的洗涤确保只有特异的结合事件被保留，在最后一步产生信号。而不充分的洗涤会导致差异 ...

　　优化ELISA的重点之一在于洗涤。生物医药cdmo洗涤步骤可降低未结合抗体所引起的背景信号，从而增加分析的信噪比。每一步之间的洗涤确保只有特异的结合事件被保留，在最后一步产生信号。而不充分的洗涤会导致差异和高背景，从而带来不理想的结果。本文将为你介绍一些利用自动洗板机来洗涤ELISA平板的技巧。
　　免疫分析，比如ELISA，一般包含两个或以上的孵育步骤，中间以洗涤隔开。ELISA通常在96孔板中开展，其上包被了结合抗原或抗体。在封闭步骤后，包被后的平板首先与一抗或抗原孵育。随后通过一些洗涤步骤去除未结合（低亲和力）的抗原-抗体复合物。接着，平板与二抗孵育。这种带有酶的抗体与高亲和力的抗原-抗体复合物结合。之后，又是一轮洗涤。最后是添加底物并检测信号。
　　我们可使用多种底物来检测最终的抗原-抗体复合物。底物分为三类：自然发光、化学发光和荧光。准确说来，ELISA这个词指的是使用自然发光底物的分析。而使用化学发光底物的分析被称为Luminescent Immunoassay（LIA），使用荧光二抗的分析被称为Fluorescent Immunoassay（FIA）。
　　优化ELISA的重点之一在于洗涤。洗涤步骤可降低未结合抗体所引起的背景信号，从而增加分析的信噪比。每一步之间的洗涤确保只有特异的结合事件被保留，在最后一步产生信号。而不充分的洗涤会导致差异和高背景，从而带来不理想的结果。本文将为你介绍一些利用自动洗板机来洗涤ELISA平板的技巧。
　　洗涤参数
　　一些参数会影响洗涤步骤的效果。第一个主要的参数是洗涤量。自动洗板机会分配洗涤液。如果你之前遭遇过高背景，那么不要犹豫，将洗涤量调为高，最好是比包被体积更高。太少的洗涤液会让一部分分析表面洗涤不到，从而明显增加背景。所有反应孔的洗涤量必须相同。ELISA板的商通常会在试剂盒的使用手册中列出包被量。行业中通常使用的包被量是200 μl。如果你的试剂盒也是这样，那么商可能会建议使用300 μl洗涤液进行洗涤，以便清洁整个反应孔的壁。一般来说，洗涤量越高，则孵育步骤残留的抗体或抗原量就越少。