明白高效液相色谱常出现的问题2023/7/12 6:01:37

2023-7-12 06:01| 发布者: msmkmm2012| 查看: 85| 评论: 0

摘要: 1色谱柱跑干了，处理方法：将贮液瓶装入重蒸水，首先按键，将柱前气柱排出，若法排出，可将色谱柱前拆下，用注器抽吸。待柱前气体排空后，连接色谱柱，用水高低流速交替冲洗色谱柱，直至柱压稳定为止。三坐标的最新 ...

1色谱柱跑干了，处理方法：将贮液瓶装入重蒸水，首先按键，将柱前气柱排出，若法排出，可将色谱柱前拆下，用注器抽吸。待柱前气体排空后，连接色谱柱，用水高低流速交替冲洗色谱柱，直至柱压稳定为止。三坐标的最新消息可以到我们平台网站了解一下，也可以咨询客服人员进行详细的解答！http://ahyunpao.com/

2基线不稳，有静电，处理方法：检查接地是否良好。
3峰面积变化非常大，处理方法：检查是否进样阀堵塞。
4基线突然提高，变粗，处理方法：检查样品池能量，若低于正常值，说明检测器污染。
5柱压变动范围较大，处理方法：多为进气泡。高低流速交替冲洗。
6柱效或峰形突然变差，处理方法：更换预柱。
7塔板数低：色谱柱选择不对，二次保留、峰形不好的影响
8色谱柱易变性：色说柱选择不对，二次保留的影响
9色谱柱寿命短：色谱柱选择不对，样品需预处理（PH3或PH7）
10保留值变化：色谱柱平衡不够，流动相比例改变
11出现新的干扰峰：初始分离不够或初始样品代表性选择波长要从以下几个方面考虑：
1检测波长要大于溶剂截止波长。如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。溶剂有强吸收后，基线抬高，减小检测的线性范围而且会加大基线噪声，对溶质的检测灵敏度下降。
2对各组分都要有适当的吸收。一般是不可能做到的。所以只要选择一个对大多数组分都有较大吸收的波长就可以了。
3外标法定量时，要选择被测组份比较大吸收波长。254对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。对饱和基团也有弱的吸收。而对于常见的乙腈、甲醇的透过率很高。是在不知道用什么波长时比较理想的试验波长。（一）涡流扩散（E）流动相碰到较大的固体颗粒，就像流水碰到石头一样产生涡流。如果柱装填得不均匀，有的部分松散或有细沟，则流动相的速度就；有的部位结块或装直紧密则流就慢，多条流路有有慢，就使区带变宽。因此，固相载体的颗粒要小而均匀，装柱要松紧均一，这样涡流扩散小，柱效率高。（二）分子扩散（M）分子扩散就是物质分子由浓度高的区域向浓度低的区域运动，也称纵向分子扩散。要减少分子扩散就要采用小而均匀的固相颗粒装柱。同时在操作时，如果流速太慢，被分离物质停留时间长，则扩散严重。（）质量转移（M）被分离物质要在流动相与固定相中平衡，这样才能形成较窄的区带。在液相色谱中，溶质分子要在两个液相之间进行分配，或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的时间。当流速时，转移速度慢，来不及达到平衡动相就向前移，这各物质的非平衡移动，使区带变宽。四）动相流速当流速太低时，分子扩散严重，特别是在气相色谱中尤为突出。如将理论塔板高度对流速作图，理论塔板高度随流速增加而急速下降，当达到比较低值时，流速再加大则质量转移起主要作用，理论塔板高度又加大。在高效液相色谱中，流速稍影响不大，但在凝胶过滤色谱中，因为物质要渗透到凝胶内部，所以质量转移影响大，流速咖大会降低柱效率。五）固定相颗粒大小定相颗粒越小柱效率越高，对流动相流动的阻力越大，需要加大压力才能使它流动。1、开泵后压力即升高至比较高限度，经过对色谱柱前，色谱柱，色谱柱后的分段测试，确定为检测池堵塞。2、换检测波长后，色谱峰面积比以前做的小很多，怀疑进样环或管路漏夜，经检查，排除，比较后确定为，检测波长的显示值和际值不符。由气味、景象和声音可以发现的问题你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。
你比较好养成习惯，每天花上几分钟运用你的感官（除了味觉）来感觉你的液相色谱是否存在问题，这样可以帮助你迅速找到问题所在。例如：在你看到漏液之前，你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通过眼睛看到。A、溶剂的气味原因解决方法1、漏液1、见前2、溅出2、、检查废液瓶是否已满、找到溅出的部位并清洗干净B、热气味原因解决方法1、仪器过热1、、检查并调节通风设施、检查并调节温度设定、关掉仪器，查找维修手册C、读数不正常原因解决方法1、压力不正常1、见前2、柱温箱问题2、、检查并调节设定、参照用户手册3、检测器灯失效3、更换灯D、灯警告原因解决方法1、压力超出极限值1、、检查是否阻塞、检查并调节极限值的设定2、其它警示灯2、见用户手册E、警告音原因解决方法1、溶剂漏溅出1、找到并解决2、其它警告音2、见用户手册F、刺耳的短音或长音原因解决方法1、轴承失效1、见用户手册2、润滑不够2、进行恰当的润滑3、机械故障3、见用户手册进样阀可能发生的问题A、手动进样阀，转动不灵原因解决方法1、转子密封损坏1、更换或调整转子密封2、转子太紧2、调整转子的松紧度B、手动进样阀，载样困难原因解决方法1、进样阀安装不当1、重新安装2、定量环阻塞2、清洗或更换定量环3、进样器污染3、清洗或更换进样器4、管路阻塞4、清洗或更换管路C、自动进样阀，不能转动原因解决方法1、压力（或电源）1、提供恰当的压力（电源）2、转子太紧2、调整转子的松紧度3、进样阀安装不当3、重新安装D、自动进样阀，其它问题原因解决方法1、阻塞1、清洗或更换阻塞部件2、机械故障2、见随机维修手册3、控制器故障3、维修或更换控制器HPLC柱压过高：1拆去保护柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；2把色谱柱从仪器上取下来，如果压力仍然不降，则是管路堵塞，须清洗，如果压力下降了，将柱子的进出口反过来接再仪器上，用10倍量柱体积的流动相冲洗柱子，如果柱压仍不降，再检查3更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明溶剂获样品中含有固体颗粒，若柱压还高，可在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器基线不稳，上下波动或漂移1。流动相有溶解气体；用超声波脱气15-30分钟2。单向阀堵塞，取下超声去除堵塞物3。泵密封损坏，造成压力波动，更换泵密封4。系统存在漏液点，确定漏液位置并维修5。流通池内有赃物或者杂质，清洗杂物6。柱后产生气泡，流通池出液口加负压调节器7。检测器没有设定在比较大吸收波长处8。柱平衡慢，特别是流动相发生变化时。用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的心流动相对柱子进行冲洗1检测信号出现倒峰，检查检测器与主机相连接是否有松动，可以把下重新连接。2夏季气温高，水容易生菌，要求HPLC所用重蒸水必须每天都要更新。3由甲醇换到流动相平衡时，压力先稍稍下降，然后慢慢回升，可能是混合池混合效果不好，也可能是B泵轻度堵塞。4色谱柱长期不用，应用甲醇冲洗2以上后，宁上两端螺丝保存。岛津机器易出现的毛病是：1、压力不稳：单向阀堵塞，可拆下，用甲醇水超声；或漏液；管路过滤器损坏；2、基线噪音变大：未接地线，可在检测器的外壳外接一根铁丝连地；灯能量不足，可在功能中查找灯的使用时间，或拆开机器外壳，观看紫外灯的强度；检测池污染，拆下柱子，用体积连接器连接泵和检测器，用异丙醇小流速冲洗半个小时即可；流动相污染或进气泡。3、泵头有盐析出：应经常用5％异丙醇清洗柱塞杆，否则易磨损。4、进样口漏液：可能是标准针头变形或损坏，使得进样器磨损，不好的针头应及时扔掉。