抗体人源化细胞铺板如何才能铺得均匀?

2023-7-11 23:48| 发布者: 大海的鱼| 查看: 97| 评论: 0

摘要: 　做 cell biology 实验，抗体人源化细胞铺板大概是很常见的一个实验了。但是有很多人不是很得要领，铺得不是均匀：要么中间密周围稀，要么周围密中间秃顶。在这里分享一些一些技巧：　　1、一般96孔板每孔是加100 ...

　做 cell biology 实验，抗体人源化细胞铺板大概是很常见的一个实验了。但是有很多人不是很得要领，铺得不是均匀：要么中间密周围稀，要么周围密中间秃顶。在这里分享一些一些技巧：
　　1、一般96孔板每孔是加100微升细胞悬液，从孔的左边靠近底部加入，加完半边板后，将未加的细胞悬液混一下再，继续加剩余的半边板子，都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘，注意把握力度（一般轻巧敲三下），太强或次数太多会导致细胞集中成堆，将板顺时针旋转（逆时针效果不好），依次敲击剩余三个边，静置约5分钟，放入37度培养箱。
　　2、细胞悬液加完后，将细胞培养板抬高，对着灯光，从底部往上看，看细胞有没有抱团。然后从底部敲击，使之分散。
　　3、如果实验室有平板振荡器的话，建议用这个仪器稍振荡一下，效果不错，就是振幅小，频率高的那种。
　　4、细胞要尽量打散，大部分呈单个状态。离心后，要充分悬浮！还有转移到六孔板后，是要晃得！晃的时候不要让那个细胞液转圈，不然细胞就全被带到中间去了，就会不均匀！
　　5、一瓶细胞长满后，正常处理，在培养瓶里吹匀，然后铺6孔板，每孔2毫升，铺完之后不用观察直接用酒精棉擦拭，然后放到培养箱里，轻微的左三圈右三圈前三圈后三圈。基本上24小时之后观察每孔的细胞都会很均匀。
　　6、计算好所需要的全部液体量和细胞量，混匀后，加到六孔板里，六孔板按横8字型晃，显微镜下观察，如果不均匀，按上述方法再晃。如果细胞未计数直接种的话，在种六孔板的过程中，随时晃一下混匀用的瓶子，瓶子我通常是顺时针或逆时针转圈。
　　7、放在水平板面上先上下移动，再左右移动，每个方向５到６次，但关键的是摇完后直接放入培养箱中，不要再做过多的运动，例如放到镜下去看，否则很容易就又聚到中间去了